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 (1)根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中的細(xì)胞轉(zhuǎn)化法(DE3310849)制備L-蘋果酸鹽和富馬酸鹽混合液。將從土壤中分離得到的Aspergilluswentii屬菌株在糖30g/L，磷酸氫二銨3g/L，硫酸銨2g/L，氯化鉀2g/L，硫酸鎂1g/L，富馬酸鈉5g/L的培養(yǎng)液中培養(yǎng)48小時(shí)，過濾分離出細(xì)胞。在60-70℃下配制2％的卡拉膠溶液，降溫到50℃時(shí)將分離出的細(xì)胞按10％(w/w)加入，攪拌均勻后倒入盤子中凝固，制成5mm×5mm×5mm的固定化細(xì)胞。然后裝入8cm×60cm的玻璃柱。將1.4M的富馬酸鈉溶液以1000ml/h的速度流經(jīng)固定化細(xì)胞柱，得到L-蘋果酸鹽和富馬酸鹽混合溶液。(2)取1000ml經(jīng)步驟(1)得到Chemicalbook的混合液，其中含L-蘋果酸鈉186g，富馬酸鈉56g。將溶液加熱到60℃，攪拌下加入170g(摩爾比1.05∶1)富馬酸，攪拌反應(yīng)3.5小時(shí)，PH＝3.2，冷卻到15～20℃，過濾，濾餅用少量水洗，然后用NaOH中和至PH＝7-8供細(xì)胞轉(zhuǎn)化用。所得濾液980ml，含富馬酸單鈉40g。加熱至85℃，通過1500ml001x7強(qiáng)酸性陽離子交換柱(直徑6cm，高60cm)，收集淋洗液經(jīng)減壓濃縮，L-蘋果酸濃度增加到40％時(shí)，冷卻到10～15℃，過濾回收富馬酸。濾液進(jìn)一步減壓濃縮到L-蘋果酸濃度至80～82％，冷卻到15℃，結(jié)晶出91gL-蘋果酸，母液中含有46gL-蘋果酸，母液可循環(huán)使用。L-蘋果酸收率相當(dāng)于97％。